荧光原位杂交技术及其在血液系统疾病中的应用

作者：张艳　 北京大学血液病研究所 2007-5-24 13:57:11
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荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）技术是20世纪80年代以后结合细胞遗传学、分子生物学和免疫学发展起来的新的分子细胞遗传学技术。与传统细胞遗传学相比,FISH不需要中期分裂相，因此可分析大量间期细胞，且操作相对简单，重复性好、敏感性和特异性高。FISH的定义利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记或先以非放射性物质（生物素、地高辛等）标记后与靶DNA进行杂交，再通过免疫组织化学方法连接上荧光素标记物，最后在荧光显微镜下观察杂交信号，从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析。FISH检测种类（1）间期FISH  采用针对染色体着丝粒的α-卫星DNA探针，可检测染色体的数目异常和移植后供受者的嵌合状况；还可应用染色体位点特异性探针，检测特定位点基因的缺失或染色体易位导致的融合基因；（2）中期分裂相FISH  应用针对整条染色体或长短臂的涂抹探针，检测染色体的结构重排。FISH的新发展1.多色FISH（multiplex-FISH和SKY），都是应用5种荧光素同时标记24条染色体，制备整套染色体涂抹探针，与待测标本的中期分裂相杂交，应用配备有Fourier光谱仪、CCD冷式摄象系统和计算机图象处理系统等装置的荧光显微镜进行检测，通过一次杂交即可分辨全部人类染色体，对识别不明来源的标记染色体、隐匿易位和检测复杂的染色体数目和结构异常很有优势，是分子细胞遗传学的又一次重大进展。缺点是不能识别染色体的臂内倒位和微小的缺失和重复等。2.比较基因组杂交(comparative genomic hybridization, CGH) 将等量的待测基因组DNA与正常的参照DNA分别以红绿两种荧光素标记后，再与正常人中期染色体进行杂交，根据中期染色体每个位点上两种荧光强度的比率来定量分析待测基因组D

编辑： 陆丽