血培养快速药敏测试EUCAST和CLSI方法的比较

时间:2021-05-08 14:27来源:医师报 作者:廖全凤 康梅

本文作者:四川大学华西医院实验医学科临床微生物实验室  廖全凤 康梅


立夏是二十四节气中的第七个节气,也是夏季随着抗菌药物耐药性的提高,快速抗菌药敏测试(RAST)变得越来越重要,尤其是针对血流感染的患者,快速而准确的药敏对其治疗至关重要。研究表明,RAST和适当的早期治疗可改善血流感染和败血性休克的临床结局。但传统的药敏测试方法在血培养报阳后至少2 d才能完成,而针对血培养的RAST方法可明显缩短药敏测试时间。据此,欧洲药敏试验委员会(EUCAST)和美国临床与实验室标准化研究所(CLSI)于2019年和2021年分别发布了针对血培养的快速药敏检测方法。两个国际组织公布的方法均可被临床微生物实验室评价和使用。现将两个标准为大家做一个比较分析。


EUCAST方法可以对血培养分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌进行RAST。从报阳后24 h内的血培养瓶抽取100~150ul未稀释的血液至MH平板或MHF培养基上,同时制备一张血涂片进行革兰染色,初步判断待测菌属于阴性杆菌或阳性球菌,均匀涂布平板后在15 min内根据菌种粘贴相应的抗菌药物纸片(表1),35±1°C空气环境或CO2环境孵育4~8 h后判读结果,读取药敏之前需完成菌种鉴定,可直接对报阳的血培养液体或者孵育2~3 h后的平板上菌落进行质谱检测。


CLSI推荐的方法适用于对血培养分离出的肠杆菌目细菌进行RAST。报阳后8 h内取出血培养瓶,颠倒混匀5~10次,消毒瓶顶部后用20号注射器吸取4滴培养物到MH平板上,同时加种一个血琼脂平板用以鉴别待测菌的纯度,均匀涂布MHA后15 min内将抗菌药物纸片贴到平板上,35±2°C 空气环境孵育16-18 h后读取结果。结果判读:根据血平板判断是否为纯菌落,同时鉴定菌种,如果待测菌是肠杆菌目细菌,使用CLSI-M10031st的折点判读,如果不属于肠杆菌目,则不解释或报告结果。菌落不纯或者生长不良时,可纯化后执行标准药敏试验。天然耐药的情况下即使存在抑菌环,仍报告为耐药。如果抑菌圈内有菌落,应检测纯度,如果是纯菌则应测量内直径。


EUCAST组织欧洲55个实验室做了RAST评估,与参考方法微量肉汤稀释法的一致率可达90.0%。EUCAST发布的RAST检测谱更广,可在4~8 h内完成血培养常见分离菌株对临床常用药物的敏感性检测。


CLSI发布的血培养RAST方法与微量肉汤稀释法的符合率为90.0%左右,CLSI推荐的RAST方法覆盖了血培养肠杆菌目细菌,可在报阳后16~18 h内出具菌株对氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、妥布霉素和复方新诺明的药敏结果。


与传统的血培养初步药敏试验相比,RAST将其规范化和标准化,明显缩短了检测和报告时间,可为脓毒血症病人提供更快速的病原学药敏信息,值得各个临床微生物实验室摸索和推广。


表1 CLSI和EUCAST的血培养RAST比较


EUCAST RAST操作SOP文件链接:https://www.eucast.org/rapid_ast_in_blood_cultures/methods/

EUCAST RAST药敏折点文件链接:

https://www.eucast.org/rapid_ast_in_blood_cultures/breakpoints_for_short_incubation/


临床实践建议

#01

血培养快速药敏实验对于临床脓毒血症患者而言意义重大,可能挽救病人生命,临床微生物实验室应在此领域摸索和规范化,不断提高实验室的感染病诊断能力和用药指导能力。

#02

EUCAST在血培养快速药敏的标准化领域起步较早,目前适用的菌种以及药物均较多,已经积累了一定的经验。今年CLSI也开始重视RAST,推出了肠杆菌目细菌对于6种抗菌药物的RAST方法,但遗憾的是没有包含重症败血症病人中较常用的碳青霉烯类药物,期待明年可以增加适用菌种和重要抗菌药物。

#03

实验室在启动血培养RAST临床流程前务必要仔细阅读相应的SOP文件,因为大家可能注意到了虽然药敏平板和接种量相似,但EUCAST和CLSI的药敏纸片含量以及选用的折点是有差异的,因此实验室务必在开展RAST检测前了解这些差异以确保操作和报告的准确性。

#04

无论是EUCAST还是CLSI的血培养快速药敏指南,都要求实验室在报告药敏前鉴定出致病菌,这对临床微生物实验室提出了较高要求。大部分临床常见血流感染菌接种至血平板上35°C孵育后4-8h可以有少量肉眼可见的生长,因此拥有MALDI-TOF的实验室,建议建立流程进行快速质谱检测;没有MALDI-TOF的实验室也应建立其他快速鉴定病原菌的方法。


审稿人:北京协和医院检验科  赵颖  杨启文




责任编辑:裘佳
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