血培养快速药敏测试EUCAST和CLSI方法的比较

时间：2021-05-08 14:27:22来源：未知作者：廖全凤康梅阅读： 429514

本文作者：四川大学华西医院实验医学科临床微生物实验室廖全凤康梅

立夏是二十四节气中的第七个节气，也是夏季随着抗菌药物耐药性的提高，快速抗菌药敏测试（RAST）变得越来越重要，尤其是针对血流感染的患者，快速而准确的药敏对其治疗至关重要。研究表明，RAST和适当的早期治疗可改善血流感染和败血性休克的临床结局。但传统的药敏测试方法在血培养报阳后至少2 d才能完成，而针对血培养的RAST方法可明显缩短药敏测试时间。据此，欧洲药敏试验委员会（EUCAST）和美国临床与实验室标准化研究所（CLSI）于2019年和2021年分别发布了针对血培养的快速药敏检测方法。两个国际组织公布的方法均可被临床微生物实验室评价和使用。现将两个标准为大家做一个比较分析。

EUCAST方法可以对血培养分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌进行RAST。从报阳后24 h内的血培养瓶抽取100~150ul未稀释的血液至MH平板或MHF培养基上，同时制备一张血涂片进行革兰染色，初步判断待测菌属于阴性杆菌或阳性球菌，均匀涂布平板后在15 min内根据菌种粘贴相应的抗菌药物纸片（表1），35±1°C空气环境或CO2环境孵育4~8 h后判读结果，读取药敏之前需完成菌种鉴定，可直接对报阳的血培养液体或者孵育2~3 h后的平板上菌落进行质谱检测。

CLSI推荐的方法适用于对血培养分离出的肠杆菌目细菌进行RAST。报阳后8 h内取出血培养瓶，颠倒混匀5~10次，消毒瓶顶部后用20号注射器吸取4滴培养物到MH平板上，同时加种一个血琼脂平板用以鉴别待测菌的纯度，均匀涂布MHA后15 min内将抗菌药物纸片贴到平板上，35±2°C 空气环境孵育16-18 h后读取结果。结果判读：根据血平板判断是否为纯菌落，同时鉴定菌种，如果待测菌是肠杆菌目细菌，使用CLSI-M10031st的折点判读，如果不属于肠杆菌目，则不解释或报告结果。菌落不纯或者生长不良时，可纯化后执行标准药敏试验。天然耐药的情况下即使存在抑菌环，仍报告为耐药。如果抑菌圈内有菌落，应检测纯度，如果是纯菌则应测量内直径。

EUCAST组织欧洲55个实验室做了RAST评估，与参考方法微量肉汤稀释法的一致率可达90.0%。EUCAST发布的RAST检测谱更广，可在4~8 h内完成血培养常见分离菌株对临床常用药物的敏感性检测。

CLSI发布的血培养RAST方法与微量肉汤稀释法的符合率为90.0%左右，CLSI推荐的RAST方法覆盖了血培养肠杆菌目细菌，可在报阳后16~18 h内出具菌株对氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、妥布霉素和复方新诺明的药敏结果。

与传统的血培养初步药敏试验相比，RAST将其规范化和标准化，明显缩短了检测和报告时间，可为脓毒血症病人提供更快速的病原学药敏信息，值得各个临床微生物实验室摸索和推广。

表1 CLSI和EUCAST的血培养RAST比较

EUCAST RAST操作SOP文件链接：https://www.eucast.org/rapid_ast_in_blood_cultures/methods/

EUCAST RAST药敏折点文件链接：

https://www.eucast.org/rapid_ast_in_blood_cultures/breakpoints_for_short_incubation/

临床实践建议

#01

血培养快速药敏实验对于临床脓毒血症患者而言意义重大，可能挽救病人生命，临床微生物实验室应在此领域摸索和规范化，不断提高实验室的感染病诊断能力和用药指导能力。

#02

EUCAST在血培养快速药敏的标准化领域起步较早，目前适用的菌种以及药物均较多，已经积累了一定的经验。今年CLSI也开始重视RAST，推出了肠杆菌目细菌对于6种抗菌药物的RAST方法，但遗憾的是没有包含重症败血症病人中较常用的碳青霉烯类药物，期待明年可以增加适用菌种和重要抗菌药物。

#03

实验室在启动血培养RAST临床流程前务必要仔细阅读相应的SOP文件，因为大家可能注意到了虽然药敏平板和接种量相似，但EUCAST和CLSI的药敏纸片含量以及选用的折点是有差异的，因此实验室务必在开展RAST检测前了解这些差异以确保操作和报告的准确性。

#04

无论是EUCAST还是CLSI的血培养快速药敏指南，都要求实验室在报告药敏前鉴定出致病菌，这对临床微生物实验室提出了较高要求。大部分临床常见血流感染菌接种至血平板上35°C孵育后4-8h可以有少量肉眼可见的生长，因此拥有MALDI-TOF的实验室，建议建立流程进行快速质谱检测；没有MALDI-TOF的实验室也应建立其他快速鉴定病原菌的方法。

审稿人：北京协和医院检验科赵颖杨启文

责任编辑：裘佳

收藏点赞